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    細胞因子的應用及培養、凍存和復蘇

    更新時間:2023-04-19      點擊次數:525
      大多數細胞因子是免疫應答的產物,在動物和人體內可發揮免疫學效應,終會通過上調免疫細胞對抗原物質的免疫應答,介導炎癥反應而清除抗原物質。
     
      抗原刺激和病原微生物感染均可誘導體內產生細胞因子,因此細胞因子與疾病的發生、發展有著密切的關系,它們可參與疾病的發生、發展。
     
      另一方面,細胞株的培養、凍存和復蘇分為以下三點:
     
      細胞株的培養、凍存和復蘇
     
      1)細胞株的培養和傳代 培養: 用于檢測細胞因子的細胞株通常培養于含10%小牛血清和抗生素的培養液中,培養細胞因子依賴細胞株還有加入適量細胞因子。
     
      在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養,3~4天傳代一次。
     
      ★ 懸浮生長細胞的傳代: 直接直接吸去或離心后吸去培養上清液,用新鮮培養液懸浮細胞,1:3或1:5稀釋細胞后,分瓶繼續培養。
     
      ★ 帖壁生長細胞的傳代: 吸去培養液,用PBS洗滌細胞一次,加入消化液,在37℃中消化約3~10分鐘,待細胞開始脫落時,倒去消化液,加入新鮮培養液,懸浮和吹打分散細胞。也可以待細胞全部消化脫落,500×g離心5分鐘,去除消化液,用新鮮培養液懸浮細胞。1:3或1:5稀釋細胞后,分瓶繼續培養。
     
      2)細胞株的凍存: 1. 取培養2~3天生長旺盛的細胞,用細胞培養液將細胞配成2×106~2×107/ml。 在1ml細胞凍存管中加入0.5ml細胞懸液,0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亞砜(或甘油),混勻后密封。置4℃ 1小時,-20℃ 2小時,然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上過夜后浸入液氮中。
     
      3)細胞株的復蘇: 復蘇時,從液氮中取出凍存管,立即置37℃水浴中融化細胞。將細胞直接加入10ml含15%小牛血清的RPMI-1640培養液中,置37℃ 5%CO2飽和水汽二氧化碳培養箱中培養。懸浮細胞待細胞全部沉降后小心吸去上清液,更換新鮮的上述培養液,繼續培養;帖壁細胞則培養2~3小時,待細胞帖壁后,倒去培養液,更換新鮮的上述培養液,繼續培養。也可以在加入新鮮培養液以后,500×g離心5分鐘,去上清液,加入新鮮培養液,繼續培養。
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